s*********s
发帖数: 18 | 1 为什么理论预测graphene spin diffusion length 可达到100 um,但实际测量还不到
10um, 室温只有1-2 um 在single layer graphene. 另外：Spin life time is 50-
200ps, the order of magnitude shorter than expected from the intrinsic spin-
orbit coupling(-us).The results indicates that the presence of the extrinsic
spin relaxation mechanism.
请前辈指点。
why graphene for spintronics?
1. Extraordinary high mobility
>200000cm2v-1s-1 (suspended , low temperature)
>40000cm2v-1s-1 (on sio2 , room temperature)
-------Future high-speed transistor... 阅读全帖 |
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s*********s
发帖数: 18 | 2 为什么理论预测graphene spin diffusion length 可达到100 um,但实际测量还不到
10um, 室温只有1-2 um 在single layer graphene. 另外：Spin life time is 50-
200ps, the order of magnitude shorter than expected from the intrinsic spin-
orbit coupling(-us).The results indicates that the presence of the extrinsic
spin relaxation mechanism.
请前辈指点。
why graphene for spintronics?
1. Extraordinary high mobility
>200000cm2v-1s-1 (suspended , low temperature)
>40000cm2v-1s-1 (on sio2 , room temperature)
-------Future high-speed transistor... 阅读全帖 |
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c*****0
发帖数: 109 | 3 第一次拿到设计的引物。想问问大家干粉引物稀释后应该怎么分装保存？
网上说先稀释成100uM保存，工作时稀释为10uM。这个意思是不是说应该把100uM的引物
溶液分装在N个小离心管中然后冻起来，然后用的时候先稀释一个管到10uM，用完这个
管以后再稀释下一个管到10uM? 如果是这样的话那每个分装多少适合呀？
我担心分装太多了反复冻融影响寿命。 |
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a****o
发帖数: 1786 | 4 prepare one tube of 100uM and one tube of 10uM. when you run out of 10uM
working primer, make new one from the 100uM stock. DNA oligo is very tough.
don't worry about it. |
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d******u
发帖数: 178 | 5 cDNA (from 2ug total RNA): 5ul
10X Pfx buffer: 12.5ul
10mM dNTP: 3ul
50mM MgSO4: 2ul
Fwd primer (10uM): 2ul
Rev primer (10uM): 2ul
Platinum Pfx: 1ul
dH2O: 22.5ul
_______________________________
50ul/rxn
+10X enhancer: 5ul
PCR:
94C, 5min
__________
94C, 15sec
60C, 30sec
68C, 3min
__________35X
68C, 7min
4C, for ever
我用PrimerExpress设计引物，标准60度Tm。 |
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k******y
发帖数: 236 | 6 在贴壁细胞中siRNA了某基因，之后就有大量的碎片漂浮在medium里，镜下看就是小圆
泡，diameter < 10um，而细胞即使trypsin消化下来之后也并不是规则的圆形，这些碎
片并不能uptake trypan blue，计数活细胞(trypan blue-, diameter > 10um) 的数量
有明显减少, 但以trypan blue+ 的％算，并不比对照组减少很多，大概从95％减少到
90％
用FITC-Annexin V和PI double staining，做flow没有看到明显Annexin V+细胞群，
AnnexinV+ PI+细胞群会增加但也不会增加太多(本身％也小于10％)
用50uM Z-VAD-FMK caspase inhibitor 与siRNA共同处理细胞, 这些碎片就不会产生，
计数活细胞的数量也不会减少, 和对照细胞没有差别
请问这是否说明细胞有死亡？能否看出是何种死亡方式？谢谢大家! |
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p********g
发帖数: 27 | 7 一个抑制剂在肿瘤细胞培养有效抑制浓度是10uM，如果要转到老鼠身上试的话，比如说
腹腔注射，这个初始浓度范围应该怎样去决定？还是用10uM，还是从1-100uM，还是转
化为ug/kg? 有没有什么原则没有？
谢谢！ |
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r**********e
发帖数: 587 | 8 现在要做一个实验：研究g－quadruplex对transcription的影响
我的设计大概是：
pcr product为template，加入kcl，95度，然后cool overnight；从而加强g－
quadruplex的结构
然后用上面的产物，做in vitro transcription，然后检测最后的rna yield
1. 不知道有没有这种做法的。
2. 我应该用多少pcr product作为template呢？
研究g－quadruplex一般用4-10uM的oligo，加入100mM kcl。。。貌似4-10uM的oligo大
概也是700ng/ul，我觉得我的pcr 产物都达不到这么高的浓度 |
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c*w
发帖数: 50 | 9 把分子量十万的高分子 (A)与分子量2000 (B)的增塑剂,溶液共混,作膜.只有A, 得到的是
均匀的SEM照片. 5%B加入后,SEM照片得到的是类似两种粒径(10 um ,50 um)鹅卵石铺成的
小路,非常有规律的排布.几十个10um得粒子排成一个圆形,周围被50 um得粒子环绕.如同
10um的粒子形成一个个的花坛,周围是50um形成的路径.
请教:how to explain and where to fing the releated reference?
Thanks first! |
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d*******3
发帖数: 8598 | 10 10um，细菌大小
估计就是化学薄膜，拉得很薄吧
东西绝对有趣， |
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z*****z
发帖数: 2438 | 11 实在看不下去了,一个是轴、轴套配合公差，一个是紧固件，完全不是一个东西。
1um=1微米=千分之一毫米。俗称miu （不知道字怎么写）
10um=百分之一毫米，俗称丝
一般机加工（切削）的等级都是丝(10微米），
如果是miu（微米）级的，一般是通过磨
如果是+/-1微米级的，需要研磨，而且传统测量工具无法测量，要通过激光之类的非接
触式的。
级, |
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m**********e
发帖数: 12525 | 12 听你这说话口气,就是技校毕业偷渡出来搞装修的,
什么"10um=百分之一毫米，俗称丝",这都是初中就知道的玩意,你还当个宝
拿出来耍
只要正经读过机械设计的都知道,标准螺纹紧固件的须用公差是IT6,配合
螺栓是H,螺孔是G,那么M6-6H的标准螺栓,按照标准公差表,须用公差就是8微米,
楼上一逗屄还说是0.3mm,公差0.3mm的螺栓还能拧进去吗? |
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r******t
发帖数: 8967 | 13 楼上就是个键盘侠。去年去国内的机械厂访问，他们号称加工精度10um，其实拿出来的
螺丝手摸着都是糙的。 |
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g******r
发帖数: 512 | 15 编程语言之间没有什么优劣。只是材料、工艺、硬件技术在不停的进步，管理、商业运作和融资的方式在不停的改变，一切day-to-day life的发展都多多少少在影响着人们对电子产品的需求，从而推动着整体程序设计观念的变化。
在这个朝秦暮楚水性杨花的编程语言世界里，每一种新语言的设计，无非是为了解决一些现有的编程语言，在面对新的需求时，显得力不从心的地方。所以过去的几十年里，有许多语言产生和湮灭。未来的几十年里，同会有新的语言涌现，或旧的语言消失。
早期的程序是machine code，程序员都像电影Matrix里那样看着二进制，想象着蒙娜丽莎流口水。从1971年的10um process 到今天的 32 nm node，CPU总是要从内存里load binary instructions，对二进制的machine code解码，然后完成相应的加减乘除、move、shift等指令操作的。
汇编的产生是很自然的事。用一个字符串处理程序(assembler)，把JMP （60A4）转换成C3 60 A4三个byte的machine code，执行时CPU看到C3，解码为jump，继续load下面 |
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a**u
发帖数: 7128 | 16 現在3D都是塑料之類的。 金屬設備很貴， 也沒聽說有金銀的。 它是金屬粉和EPOXY混
合物。
3D 塑料精度在0.1-1毫米左右。 跟CNC 相比差很多。 沖壓跟CNC本身有區別。
CNC 一般有10um 以下精度，打印達到這個精度涉及到速度的問題。
金銀幣製作結合了CNC， 手工， 沖壓 好多道工藝。
造假的話， 紙幣偽造肯定成本最低。 好多年前好像有人就用STAPLE 買的 COLOR
PRINTER 和 PAPER 讓FBI 忙了一陣。 |
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h******g
发帖数: 11250 | 17 这是两个分别的命题，不要搅到一起
光圈0.6都有，这是证明么？
感光器高感极限
按S/N=3为有效信号算
假设照度为633Lux，相当于1W/m2
按500nm转化为光子数
pixel size为10um
量子效率假设为1
P=1/(3.0E8*6.63E-34/500E-9)=25E5 electron/s/pixel
S/N=Pt/(sqrt(Pt)+Dt+R)
D=1E4 electron/s/pixel http://www.mssl.ucl.ac.uk/www_detector/optheory/darkcurrent.html
R=50 (数据来源是实验室）
如果1/100s曝光
S/N=81
如果光强小6档
S/N=2.3
根本就不算有效信号了
提光圈物理极限到了，感光器物理极限没到的举证吧
你那个不是物理极限 |
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m*******h
发帖数: 601 | 18 苹果的外壳是怎么加工的？cnc能达到10um，但是成本上是不是太高了 |
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s***h
发帖数: 592 | 19 omg,加工精度0.1um
这牛皮吹得也太大了
最常用的合金钢，温度变化一摄氏度产生的涨缩都在10um/m
太佩服写这文章的小子了，人才中的人才
0. |
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a***e
发帖数: 27968 | 20 高分屏制作成本不比同面积的低分屏高
10um级别的光刻，在20nm的时代就是白菜价
色彩对比度比什么分辨率重要多了
12"这个级别，720p就够了，再往上都是点缀而已 |
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s******y
发帖数: 28562 | 21 Promega, TnT T7 coupled transcription/translation kit
Depending on what degradation system was responsible. In vitro translation
system also contain ubiquitin and proteasome. However, it does not have
lysosome or golgi (which also contains protein degradation machinery).
You can add 10uM MG132 in the in vitro translation system (or your 293T cell
culture medium) to inhibit the proteasome.
的系统更容易降解我的蛋白？
Yes. If you want, you can try bacterial in vitro expression system. BUT, it
won't contain the |
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T**********t
发帖数: 1604 | 22 质谱我不熟，是别人带我做的。应该是MALDI-TOF。我不会做calculation啊，就是在
FlexAnalysis下面打开质谱图，在图上找那个最高的峰定位看分子量。对于质谱我所知
就这么多了。。。汗。
样品preparation什么的都是我做的，蛋白对PBS透析过夜，然后用0.1%的TFA溶液稀释
到10uM左右，再和Matrix（我记得是SA，不过不太确定） 1：1混合。加样上样都很简
单，但是仪器的setting都是别人弄好了现成的，我按按鼠标而已。再汗。。。
样品的分子量计算我是偷懒用在线软件算的，把蛋白序列输进去，计算出理论分子量，
我不知道它用的是average还是monoisotopic mass：
http://www.scripps.edu/~cdputnam/protcalc.html
我总共有14个样品，10个样品的主峰分子量都是对的，基本上是M或者M+1，但是有4个
样品差得比较多，其中两个低了14，一个低了74，另一个低了113。 |
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h****g
发帖数: 439 | 23 另外，你一般切多厚来观察FITC-Dextran？ 10um？
还有，最后怎么分析结果呢？是根据像素值大小来分辨哪是血管里的，哪是血管外的?
还是染cd31还判断？
谢谢！！ |
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s******e
发帖数: 370 | 24 我倒是没有切过10um以下的，但是速度是跟当时切片的条件相关的，很难说该用快还是
慢，要试才行。我一般都用40～50％的速度，算比较快的。
我的感觉冰冻切片会受很多因素影响，比如chamber 温度，object温度，甚至当天的空
气湿度。所以我现在都尽量避免在雨天切片，免得给自己找麻烦。
一家之言仅供参考 |
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s******r
发帖数: 2876 | 25 这个chamber温度，object温度一般如何选择？
有没有什么经验规则？
我倒是没有切过10um以下的，但是速度是跟当时切片的条件相关的，很难说该用快还是
慢，要试才行。我一般都用40～50％的速度，算比较快的。
我的感觉冰冻切片会受很多因素影响，比如chamber 温度，object温度，甚至当天的空
气湿度。所以我现在都尽量避免在雨天切片，免得给自己找麻烦。
一家之言仅供参考 |
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J********n
发帖数: 534 | 27 I have a few questions 楼主:
1. What is the required crystal size? 10um? 1um? 100nm? 10nm?
2. How to solve the phase problem? Is the laser synchronized to the extent
that you know the phase information already?
3. How many micro crystals are needed for a complete dataset assuming only
one image is taken for each micro crystal?
4. How do you manually handle the crystals? |
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M****e
发帖数: 178 | 28 网上说先稀释成100uM保存，工作时稀释为10uM。
按字面理解，意思是，引物stock是100uM，如果你的PCR反应体系是20ul，就向PCR
mixture中加2ul的引物stock。
不过，我们做PCR，引物的工作浓度（在PCR反应体系中的浓度）是0.5uM. 我们会把引
物稀释成5uM，每管100ul保存。反复冻融没什么问题。 |
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m**z
发帖数: 787 | 29 yes. you need purified proteins for that. it basically gives you the info of
the size of the particle. you don't need a lot, maybe 10uM of several
hundred ul. I believe it can be recycled though. |
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s******s
发帖数: 13035 | 30 现在做的一个cell一用抗生素就碎掉了，本身又不太attach，所以
没法通过反复pbs洗来去除死细胞。我试了一个密度梯度离心histopaq，
有很多细胞被扔掉了，而且有点担心会不会弄死细胞。各位有什么高招？
我想用cell strainer把cell留下，碎片流掉。但是现在的strainer
多是40/70/100um的，有没有比较小的strainer或者mesh, 大概5－10um的？ |
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d**********2
发帖数: 103 | 31 小弟想向各位大虾问一下caspase 3/7 的问题：）
用得是promega 的 Apo-ONE® Homogeneous Caspase-3/7 Assay kit
小弟想 用不同GFP融合蛋白转染293T 细胞然后用这个KIT监测Caspase-3/7 的活性 但
是结果很奇怪
用Staurosporine(10uM, 5H)诱导细胞凋亡所产生的信号比GFP空载转染的细胞的信号还
低。。。
所以想问问到底是什么问题。。。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 32 Thank you guys.
I use PGEX2T vector so GST is on the N-terminus.
I normally do 100ml culture size. Here is how I did this:
1. small culture of the bacteria from glycerol stock O/N, about 6-8ml.
2. transfer the small culture to 100ml 2xYTA medium in the next day morning
, shaking at 300rpm, 37degrees.
3. it ususally takes about 1hr 40min - 2 hrs to have an OD600 around 0.75.
4. add IPTG (stock 100mM) 100ul to get a final concentration of 0.1mM.
5. Lower the temp to 22degrees and shake at 300 rmp... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 33 MG132 在10uM 以上对proteasome抑制很明显。有些好的杂志不接受这个作为
单独证据是因为MG132 对很多其他蛋白酶也有抑制作用，所以需要其他证据
一起来confirm. 但是这个并不是你的问题的所在处。
你的情况下，你用6ohda 处理细胞有多久？用MG132又有多久？
另外，你的蛋白并不一定就是降解，有另外几种可能，一个是表达减少，
另外一个是分泌出去了。 |
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n*******l
发帖数: 75 | 34 多谢啊，我用6ohda有8个小时，MG132(10uM)也是提前处理半个小时，然后再加入6ohda的啊。
而且我检查过此蛋白的mRNA的水平，是上调的。
另外，如果是翻译水平上减少，这个要怎么证明呢？我的蛋白应该不是分泌性的蛋白啊，没有看到过，你的意思说我应该弄点培养基看看是否有此蛋白呢？还是怎样啊？ |
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g*********5
发帖数: 2533 | 35 10uM lactacystin?
MG132 20um？ |
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F*****e
发帖数: 182 | 36 用mouse tissue paraffin section做RNA in situ hybridization，最近反复的摸索条
件，RNA probe的浓度加到很高（5 ug/ml)，信号强度才勉强可以接受。我用的10um的
片子，DIG-labeled RNA probe。请问做过的朋友怎样能提高灵敏度？多谢！ |
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v*********d
发帖数: 382 | 37 这个要看用途了，300nM好像多用在long term culture 杀细胞。如果autophagy的话，
2uM，要半小时见效可以提高到10uM |
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w****w
发帖数: 12 | 38 concentration is too high. if you want to treat your cell longer, i suggest
you start with 1-10uM. if for overnight, 10-50uM max 100uM will be enough.
good luck. |
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w****w
发帖数: 12 | 39 concentration is too high. if you want to treat your cell longer, i suggest
you start with 1-10uM. if for overnight, 10-50uM max 100uM will be enough.
good luck. |
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w****l
发帖数: 535 | 40 10um frozen section 用的SV2和a-bungarotoxin的double fluo stain
感觉autofluorescence很厉害，要用多少magnification看
看别人paper一对对的很漂亮
dissection，fix, section有什么讲究 |
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b******n
发帖数: 4225 | 41 俺的一个细菌，很小，大概直径0.5um，长5-10um
想通过做一个poteinX-EGFP的融合construct定位(可能是在periplasmic space)
什么样的confocal可以有这种sensitivity和resolution
哪个facility可以提供这种服务呢
谢谢啦 |
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s*********a
发帖数: 1409 | 42 老板要交grant，天天逼data，我快被逼疯了。
实验室学生切的片子，是PBS perfuse的小鼠脑子，然后在4%PFA 4度过夜fix，然后放
到pbs里，室温切片，40UM厚。我第一次觉得片子太厚了，用了漂片法，荧光染色，染
完了再mount到slides上，效果还马马虎虎。可是老板不喜欢荧光，喜欢DAB染色。说是
同时有人的脑染色，人脑用的是DAB，鼠脑也要用DAB才行。我也不知道是什么理论。我
只好又做DAB染色。可是我没做过DAB，完全照实验室的protocol做了两次，没做出来。
用的是贴片法，我想是不是片子太厚了，所以染不出来。可我老板偏认定是抗体浓度的
问题，让我继续试抗体浓度。我觉得真不是浓度问题，因为啥也没出来。
这个实验室染色用的protocol和我以前lab的很不一样。我们以前都是pbs+PfA灌流，然
后fix过夜，蔗糖沉降，oct包埋冷冻切片，从来没超过10um厚，然后荧光染色。这个
lab染色就没怎么做出来过，可是老板偏要按照他那套来。我觉得他就是火星来的。 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 43 嗯,你和我老板刚好相反
她什么都爱用荧光,特别不喜欢DAB.....
40uM肯定可以用的
我们实验室常用的就是40uM,也是PBS 灌流然后4% PFA fix 过夜,
不过是用的冷冻切片
当然10um的切片做出来的IHC/IF要更sharp一点
你先看看二抗是不是用对了 |
|
s*********a
发帖数: 1409 | 44 老板要交grant，天天逼data，我快被逼疯了。
实验室学生切的片子，是PBS perfuse的小鼠脑子，然后在4%PFA 4度过夜fix，然后放
到pbs里，室温切片，40UM厚。我第一次觉得片子太厚了，用了漂片法，荧光染色，染
完了再mount到slides上，效果还马马虎虎。可是老板不喜欢荧光，喜欢DAB染色。说是
同时有人的脑染色，人脑用的是DAB，鼠脑也要用DAB才行。我也不知道是什么理论。我
只好又做DAB染色。可是我没做过DAB，完全照实验室的protocol做了两次，没做出来。
用的是贴片法，我想是不是片子太厚了，所以染不出来。可我老板偏认定是抗体浓度的
问题，让我继续试抗体浓度。我觉得真不是浓度问题，因为啥也没出来。
这个实验室染色用的protocol和我以前lab的很不一样。我们以前都是pbs+PfA灌流，然
后fix过夜，蔗糖沉降，oct包埋冷冻切片，从来没超过10um厚，然后荧光染色。这个
lab染色就没怎么做出来过，可是老板偏要按照他那套来。我觉得他就是火星来的。 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 45 嗯,你和我老板刚好相反
她什么都爱用荧光,特别不喜欢DAB.....
40uM肯定可以用的
我们实验室常用的就是40uM,也是PBS 灌流然后4% PFA fix 过夜,
不过是用的冷冻切片
当然10um的切片做出来的IHC/IF要更sharp一点
你先看看二抗是不是用对了 |
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F******p
发帖数: 2099 | 46 I think it is not about 1uM or 10uM or 100uM. It is about common sense.
The widely acceptable unit for drug study in lab mouse is drug dose vs. body
weight, which is ug/gram. |
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w****l
发帖数: 535 | 47 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
厚度10um左右 |
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w****l
发帖数: 535 | 48 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
厚度10um左右 |
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c**a
发帖数: 94 | 49 potency在 uM 级别, 低浓度基本没有效果,到10uM 差不多70%的效果, 所以图不是个S
型, 是个U型的右半边. |
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b*******0
发帖数: 48 | 50 最近在做小鼠大脑切片的immunohistochemistry, 大脑是先心脏灌注PFA, 1:1 PFA :
sucrose 过夜，30% sucrose 3h.
OCT embedding. 然后cryostat 切片10um. 想染的蛋白主要是在cytoplasm。 先室温干
燥，然后extraction buffer 10 min, block 30min, Primary Ab 4oC ON. wash.
Secondary Ab . 试过Cy5 anti-rabbit, Alexa fluor 350 anti-rabbit. 好像都没有
荧光。
请问是Primary ab 浓度太低了，还是extraction buffer 不够啊。
谢谢。 |
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