s******r
发帖数: 2876 | 1 你先看看这个基因有没有的卖，用纯的plasmid作template容易一点。
在你可以考虑在atg之前寻找合适的primer，先得到PCR product
然后再PCR ORF。
roche有一个high gc的PCR kit，用过还行。
从起始密码子开始，序列是这样的：
ATGCCGGCCGGCCGCGCCGCGCGC
gene本身65％GC含量,1.3Kb
打算从ES cell的cDNA pool中clone到lenti over expression vector，ES cell的cDNA
pool是从mRNA反转录得到的。目前试过TAKARA的LA taq，GC buffer，with or
without DMSO(5%),做了gradient Tm， 从53－58度，结果任何一个条件都不能PCR出片
断。现在想是不是因为起始序列太特别了，有没有特别的办法把这个ORF扩增出来？ |
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r*******w
发帖数: 127 | 2 首先可以在编码框之外的区域设计合适的引物，可以用基因组DNA作为对照模板（如果
没有内含子或者内含子区域不长）检测引物和该基因在cDNA pool的表达。
cDNA |
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a****d
发帖数: 1919 | 3 自己准备的cDNA文库，mRNA没有问题，qPCR可以detect到目的基因高表达；模板大概是
50－100ng/ul cDNA pool.
目前看来还是primer的GC比例过高了。
还要谢谢提醒 |
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s******y
发帖数: 28562 | 4 Depending on your purification methods, but I recommend the
RNase-free DNase kit from Qiagne.
It is CRITICAL to remove the Plasmid DNA, otherwise you are just doing PCR
on your plasmid, not the cDNA. Most RNA purification kit are designed to
remove genomic DNA but they are NOT designed to remove plasmid DNA,
therefore you have to do it yourself.
The reason you don't see the S16 can be due to:
1. you don't add enough cDNA template (plasmid DNA has strong asorption and
will mislead you to think yo |
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c****1
发帖数: 1095 | 5 有个问题，一直没有找到明确的答案，还望前辈多多指点。
如果要比较某个mRNA在不同个体，或者不同发育时期的表达水平。一般的做法
是拿个内参（比如actin）作对照，然后比较这个相对值。但问题是，有时候
内参的表达水平也不一定是稳定的。这个时候，也许用绝对定量（也就是用标
准曲线计算出绝对拷贝数）更准备点。但是，这个也是有问题，因为在做RT的
时候，一个mRNA模板不止得到一个cDNA拷贝，因为逆转录酶的活性一直有。
这样一来，之前计算出来的cDNA的绝对拷贝数也只不能反映mRNA的拷贝数。
那究竟怎么才能绝对定量特地的某个mRNA呢？
不知道我说明白没有。 |
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R*****w
发帖数: 447 | 6 这个是行不通的，一旦引物加到反应体系里了你就没法控制引物binding到那一端？
随机引物可以做正向的也可以做反向的。
但是我有一个方法，是我以前扩增Novel病毒是想到的，而且很有效。
在做反转录时用特殊的随机引物，在随机引物的5'端加一段已知序列例如：5'-
GCTACTAGTCGATCGTnnnnnn-3'。这样你就在所有cDNA的5’端加了一个Tail。
然后做PCR时forward primer用你的5’端Gene specific引物，反向引物用这个tail“5
'-GCTACTAGTCGATCGT-3'”你就肯定能扩到3’端，可以一步一步往3’端扩。
可能ronbell想说的也是这种方法吧？
其实Race最麻烦的还是5’-race。这以前一直用一个酶在cDNA的3’端加A。但不是很有
效，有时可以扩到5’端的序列有时弄很难 |
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p****p
发帖数: 3360 | 7 有意思。不过cDNA应该是RNA－DNA hybrid双链或者cDNA单链，应该用什么ligase？ |
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p****p
发帖数: 3360 | 8 有意思。不过cDNA应该是RNA－DNA hybrid双链或者cDNA单链，应该用什么ligase？ |
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c****l
发帖数: 1086 | 9 Not as easy as you thought, let's say you will got a litter of ten mice, are
you gonna breed all of the Cre+ mice with Cre- mice to figure out which is
homo Cre? Since the mice are good for breeder only 6 months or so, by the
time you figure out which is homo Cre, you are only left with 3 months. I do
not think it is practical to do this routinely.
RACE, is Rapid Amplification of cDNA Ends which is used to get full-lenght
cDNA, has nothing to do with insertional site analysis.
not sure about par |
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l**l
发帖数: 458 | 10 XDJM做RT-PCR有没有在合成完cDNA,测cDNA浓度的如果浓度有差别怎么办?谢谢! |
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m*********7
发帖数: 606 | 11 我认为楼主现在要做的不是如何选择哪个sequence，如何设计primer,而是先确定你现
在使用的组织mRNA或cDNA库里这个蛋白是否有表达，表达的isoform是否如sequence 2
所述，否则的话做的都是无用功。
你首先可以在coding region（最好是两个reporting sequence共有的区域）设计
primer扩增300-500bp的片段。这个片段大小很容易扩增，可以很迅速的告诉你此蛋白
是否在你使用的组织mRNA或cDNA库里有表达，是否可以继续使用该材料进行下一步克隆。
如成功的话，再设计两对primer,分别扩增5'-UTR至coding region, 和coding region
至3'-UTR的片段，同样也是300-500bp,这样可以确认该蛋白是否以你所说的sequence 2
的形式表达。如果是的话，再考虑重新设计primer，PCR条件优化，或者扩增两三个800
-1000bp的片段进行拼接。
如果蛋白coding region有表达，而5'-UTR或3'-UTR的扩增未成功，说明该蛋白是以其
他的isoform存在，你需要做5'-RAC |
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z**********8
发帖数: 766 | 12 从cDNA中PCR一个基因，然后直接用PCR产物测序，发现前后几次的测序结果不一致，请
问为什么？难道是因为cDNA是混合物，导致每次PCR的被扩增模版不同所造成？呼唤遗
传高手！谢谢！ |
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z**********8
发帖数: 766 | 13 抱歉我没说清我的问题。
我想看此基因有无突变，所以从不同病人样本中抽取RNA，然后从cDNA上直接扩增，得
到PCR产物后直接测序，并无克隆过程。
我的困境是，当从同一样本的cDNA上重新PCR送测序，发现结果不一致，于是郁闷了。
谢谢！ |
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z**********8
发帖数: 766 | 14 再次谢谢各位！也呼唤做过这方面的兄弟出来！
我做这个之前请教过做这方面的遗传牛人，一般测序病人样本是不需要做克隆的。因为
工作量太大。
关于测序结果，我只有FASTA results.没有running gel的raw data。
这些都不是问题，所以我想请教遗传大牛，一般只有搞突变这方面的才更有经验。
我用的样本是经过抗体瓷珠selected cells，不是tissue。
同一样本是指从一个病人的这些selected cells中提的RNA后RT所得的cDNA，三次PCR指
从同一管cDNA先后进行PCR，然后去测序。不是三次RT。 |
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s**********y
发帖数: 122 | 15 1.Improved efficiency of bovine somatic cell nuclear transfer by optimizing
operational procedures.
Zhao LW, Yang XY, Guan PF, Fu J, Li H, Zhou YY, Huang SZ, Zeng YT, Zeng FY.
J Reprod Dev. 2009 Oct;55(5):542-6. Epub 2009 Jul 1.
PMID: 19571467 [PubMed - indexed for MEDLINE]Free Article
Related citations
2.Selection of in vitro produced, transgenic embryos by nested PCR for
efficient production of transgenic goats.
Huang SZ, Huang Y, Chen MJ, Zeng FY, Ren ZR, Zeng YT.
Theriogenology. 2001 Sep 1;5... 阅读全帖 |
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m*********7
发帖数: 606 | 16 从个人经验说吧，我认为目前对于isoform的归纳总结极少，历史上遗留下来的问题极
多，而且很多人不在乎。你所提到的那些问题如果想得到答案，必须自己去下功夫挖了。
当年我做一个基因，文献历史就已经很传奇了。最早从cDNA库调出的两个基因，其中一
个在九年后被人发现有严重测序错误，另一个11年后被发现是从rat cDNA库里调出来的
（最早被当做人的基因发表）。我根据那11年后宣称是人的基因去做克隆，死活做不出
来。最后才发现这是一个只在个别组织里表达的特定isoform，不是普遍表型。直到今
天NCBI里的记录都是不正确的。
后来做几个别的基因，都或多或少有类似问题。搞得我现在每次都是在NCBI里把所有相
关记录都翻出来仔仔细细看，并且恨不得每个基因都自己做一遍5'-RACE和3'-RACE。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 17 用taq克隆了一段时间发现有突变，于是从stratagene买了pfu回来。。。
结果就杯具了。。。都摸了1周多条件了。。。
我要p的是cDNA，从公司买回来的vector。。。
primer1的Tm在55度，primer2的Tm在57度。。。于是我annealing temp用50度走。。。
看到instructions说amplify cDNA，要加Mg到3mM。。。
于是我就照做了，
那次很幸运，出现了条带，可是我再用同样的条件去重复，就是出不来条带。。。
唉。。。 |
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S*******m
发帖数: 34 | 18 有一个事情没注意到.如果你的cDNA已经在载体上说明已经是双链了.镁离子应该同普通
PCR一样,用
1.5. 3mM是用于扩增作完RT之后的单链cDNA的. |
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n********b
发帖数: 27 | 19 There is a Research Associate II position opening in a Genomics-Microarray
Core in a Cancer Center in southern CA-Los Angeles Area. Please send your
resume/CV to o****[email protected], if you are interested
in it. Thanks.
See job descriptions:
Job Descriptions
Research Associate II
Functional Genomics Core
1. Perform bench work related to research projects & services using
different genomic technologies including Affymetrix GeneChip, Agilent, Roche
NimbleGen and Illumina’s HiScanSQ microarray platfo... 阅读全帖 |
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n**8
发帖数: 221 | 21 多谢回复！
to院长，
想弄下来测序，看看怎么splicing的，还有看看predicted的motif还在不在，你之前说
的那个分段测序，我已经做过了，可是这并不能说明这个全长的cDNA存在啊？准备做
northern，但是也只能看size，具体的molecular lesion 还是不确定。
你说的这么长PCR出来不reliable，只是先粗测序看看，真正要最终高保真的克隆，当
然会分段做。
to Zifeng9527，
想搞全长的cDNA，自然尽量不会去用random primer 反转。 |
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G*****h
发帖数: 320 | 22 Oh, just realized from your last post that you used cDNA... In this case,
please make sure that your cDNA was
made from cells/tissues that actually express that particular gene of your
interest.
Run a positive control and see if you could amplify a smaller fragment as
suggested by someone else is a
good idea.
of
ligate
to |
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h******u
发帖数: 131 | 23 分子生物学技术“圣经”的作者 精选
已有 7001 次阅读 2011-6-8 07:55 |个人分类:科学|系统分类:观点评述|关键词:生物
技术 圣经 基因组 中国 美国
科学和《圣经》有着根本的冲突。
但有时，某些科学书籍很有权威、或非常流行，人们戏称为“圣经”，是引号
，不是书名号。
最近几十年，生物理论书籍中最权威的，可能是旧金山加州大学教授、美国科
学院前院长、现任《科学》杂志主编Bruce Alberts主编的《细胞的分子生物学》（
Molecular Biology of the Cell），五大洲学生用了二十多年。
2011年6月8日，也就是本周三的下午4点，应谢晓亮教授邀请来北大给学术报
告的Tom Maniatis教授，曾是我这一辈人做学生期间一本“圣经”的作者。
这本书为《Molecular Cloning》，是1980到1990年代分子生物学技术最常用
的手册，很多人靠此书入门学会克隆DNA。
Maniatis是1970年代几项主要分子克隆技术的发明者：第一个构建基因... 阅读全帖 |
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a*******u
发帖数: 2 | 24 请问PCR扩增8kb的一个基因是什么难度？
还是说没有普遍性？因基因而异？
我们实验室想以人或小鼠的cDNA为模板，扩增一个大约8kb的基因，导师觉得一次扩增
这么长的片段不太可能成功。确实，我们试了分段P，结果P 4000bp的其中片段都不成
功。我们用的是LA Taq。
请问对cDNA的反转录过程有什么特别要求吗？我们用了oligo和random引物，takara的
试剂盒。
另外如果买相应克隆的话要4000美元，比较不能接受。
大家遇到这种情况是怎么解决的呢？ |
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z*t
发帖数: 863 | 25 单酶切条件下insert磷酸化+vector去磷酸化能把自连降到多少？
现在想把一个cDNA subclone into another vector,但目的vector只有两个酶BamHI和
MluI可以切，并且BamHI还会在cDNA内部有一个切点。。。除了单酶切，我还有什么办
法么？ |
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z*t
发帖数: 863 | 26 Beutler得奖，Medzhitov会不会有意见？
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1074761309002
Ruslan Medzhitov
This year marks the 20th anniversary of a publication (Janeway, 1989) that
in many ways revolutionized our understanding of the immune system. As part
of the proceedings of the Cold Spring Harbor Symposium on Immune Recognition
, the paper authored by the late Charles A. Janeway, Jr. was not a standard
peer-reviewed publication. In fact, Charlie used to refer to it as “the
best paper I've ... 阅读全帖 |
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s******n
发帖数: 47 | 27 用一段序列blast，出来结果是RIKEN full-length enriched library的一个cDNA（
mRNA)。
请教版上的大侠，这个RIKEN full-length cDNA一定cover了全长的mature RNA了么？
不甚感激！ |
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r*****5
发帖数: 1876 | 28 以前没有做过这方面的，特像大家请教，谢过了 ：）
跟别人要了个他自己建的载体， 没有全部序列，只有酶切位点那部分的序列， 我也不
知道转录起始点在哪？ 我想做的是： 把我的蛋白CDNA 序列从起始密码到终止密码拷
贝过来， 再在CDNA 序列前加上KOZAC 序列， 最后在两端加上酶切位点和保护性碱基
就好了？ 这样对么？
可是怎么样才能保证没有移码呢？ 请各位指教啊？
我要用此质粒做转基因老鼠，已经费掉１万块了，如果再不成功，就惨了， 谢谢各位
。 |
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F*K
发帖数: 608 | 29 最近从cDNA库里克隆一个1.7kb的基因，PCR凡是用到C端的引物就得不到任何产物，而
用N端和中段的引物都能扩出预计大小的条带。
怀疑是NCBI发表的序列和cDNA中实际的基因序列有不同。
请问碰到这种情况该如何处理？谢谢！ |
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B******o
发帖数: 496 | 33 不太明白你的意思。就我知道的表达microRNA的方法，最常用的有两种，一种是pre-
miR再加上其flanking的genomic sequence。一般左右两边取150bp左右就足够了。另一
种是用已知的microRNA backbone，把中间的mature miR sequence给换成你想表达的
miR。这种方法好像就Hannon等人在用，不普遍。我自己的经验是，第一种方法比较好
，特异性好，表达量高。
用Genomic DNA做模板。cDNA没法做吧。primary transcript很快就被Drosha处理掉了
，你的cDNA里啥都找不到 |
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p*****m
发帖数: 7030 | 34 所以你之前讨论microarry表达量测的不准啊样品用得多啊都应该打回去重写 呵呵 没
听说谁是用表达量（cDNA array)来做GWAS的，做GWAS无非就是几个办法，SNP array，
用得最多；genome tiling array，估计有些不差钱的人用。然后就是whole genome
sequnrcing,这个有了NGS估计会有很多人做。
不管哪个都和cDNA array没关系。。而且不管哪个也都解决不了GWAS本身不准的问题 |
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p*****m
发帖数: 7030 | 35 所以你之前讨论microarry表达量测的不准啊样品用得多啊都应该打回去重写 呵呵 没
听说谁是用表达量（cDNA array)来做GWAS的，做GWAS无非就是几个办法，SNP array，
用得最多；genome tiling array，估计有些不差钱的人用。然后就是whole genome
sequnrcing,这个有了NGS估计会有很多人做。
不管哪个都和cDNA array没关系。。而且不管哪个也都解决不了GWAS本身不准的问题 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 36 OMG
LZ used degenerated primer for cDNA single strand synthesis
R U Seriously? an amateur molecular biologist LZ?
Please go to
//www.protocol-
online.org/prot/Molecular_Biology/RNA/Reverse_Transcription__RT____cDNA_Synthesis/index.html
RT reaction is also called first strand cDNA synthesis. Three types of primers can be used for RT reaction:
oligo (dT) primers, random (hexamer) primers and gene specific primers with each having its pros and cons.
or
/media.affymetrix.com/support/technical/usb... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 37 oligo dT 没错 如target gene 只有一段很短的碱基序列(<120bp) 已知
而没有任何其上游5' 或下游3'的序列信息
只能用oligo dT qRTPCR 从poly A tail 揪出那条mRNA to single strand cDNA
then to double strand cDNA the 附加带酶切位点的各种adapter
再用那些人工加入的带确定碱基序列的 adapter 5' to 3' 对应的 反链 3' to 5' 的引物
PCR cycling
具体步骤请看图:
snap copied and pasted from
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC50225/ |
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l**********1
发帖数: 5204 | 38 rna-seq
知道是啥吗
不清楚的话 维基一下吧
//en.wikipedia.org/wiki/RNA-Seq
RNA-seq, also called "Whole Transcriptome Shotgun Sequencing" [1] ("WTSS")
and dubbed "a revolutionary tool for transcriptomics",[2] refers to the use
of high-throughput sequencing technologies to sequence cDNA in order to get
information about a sample's RNA content, a technique that is quickly
becoming invaluable in the study of diseases like cancer.[3] Thanks to the
deep coverage and base level resolution provided by next-generation
s... 阅读全帖 |
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d*p
发帖数: 534 | 39 这几年一直在做高通量的shRNA筛选，感觉现有的产品有很大缺陷，想开发以下产品：
现在做功能研究比较快,能够进行高通量的就是knockdown and over-expression 这两
种方法。因此想做下面两类产品：
1， 覆盖全基因组的shRNA和siRNA， 每个基因两条， 每条的knockdown效率经过验证
，保证大于80%，提供蛋白水平的knockdown结果。
2， 覆盖全基因组的cDNA表达库，克隆每个基因的cDNA到Lenti-vector, 带上Barcode。
算了一下成本，用我的方法，大概5m 美元能够做完人和小鼠的这两个库，Broad现在也
在做，但是他们的方法效率太低，结果还非常不可靠，按他们的方法，50m都不够。
完成以后,
1. 可卖单个基因的产品，和市场上的公司竞争，全球市场大概有5亿美元左右的市场。
目前市场上的shRNA基本都是卖几个给你，不知道那个有用，有时候一个有用的都没有
，或者knockdown太低，看不到表型，需要自己花时间去验证。
2. 全基因组的knockdown 和over-expression library完成后，每个基因有两... 阅读全帖 |
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x**e
发帖数: 163 | 40 这个要看他是从什么品种的水稻克隆的基因，你如果是要日本晴的那当然非常简单，找
RIKEN要个全长cDNA或者直接设计引物扩增就是的，你若要RT产物做模板我可以提供。
如果是特异品种的基因可能会存在多态性，你必须要从该品种的DNA或者cDNA里去扩增
了。可以站内信箱联系我，看看有什么可以帮忙的。 |
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a*****s
发帖数: 131 | 41 Hello everyone, please help: how to detect low abundance gene expression?
Now I use 1 ug of RNA per 20 ul cDNA reaction, then I use 1 ul of the cDNA.
For beta-Actin, the qPCR picks up the signal at around 15 cycles in linear
range. But my target gene (I used 2.5 ul per reaction) can only be picked up
at around 35 cycles (1 or 2 out of triplicated reactions), where it is
already out of the linear range!! How to enhance the signal?? Please help!
Thank you very much!! So frustrated... |
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e****s
发帖数: 1125 | 42 I would check plasmid and expression more carefully before draw a conclusion
of genomic recombination.
1. Have you check the whole 4kb cDNA after site-direct mutagenesis? It will
take you 5 sequencing to check the whole cDNA.
2. How do you check the expression? Have you check both supernatant and
total lysis? by western or just SDS-PAGE. The point is single mutant could
dramatically decrease the expression.
3. Purify plasmid from the expression E.coli, do cutting test and send for
sequencing.
w... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 43 因为我觉得大部分癌症细胞都是遗传上相当不稳定的个体啊，内部产生突变什么的
难道不是公认的么？至于说量，难道少数几个细胞不就足够做一个cDNA library 了么？
我记得我在做研究生的时候，就有所谓的Cell to cDNA kit了，所以不需要很多样品也
能做吧？
另外，我再问一个实验吧，有没有人把病人身上的癌细胞单个的分离出来（这个应该很
容易做，随便一个sorting 即可），然后单个培养株，看看癌细胞之间的进化到底有没有
速度上的巨大差别？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 44 我觉得除了很少的几个例子，很少有mRNA上的突变导致mRNA 变少的吧？
如果你担忧的是cDNA 不能覆盖所有的区域，那么那个是比较合理的担忧，但是
不可能所有手段都能覆盖所有区域啊，即使是现在的NGS技术也不能保证所有地方都覆
盖啊。
另外，至于测序，几年前恐怕没有那么（在合理价钱内）大规模测序的能力，不可能把整
个cDNA library 全部测了，但是挑几个重要基因（比如说mTOR, EGFR, beta-catenin,
etc.)来跑跑看应该还是挺容易的吧？ |
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l******u
发帖数: 936 | 45 even original RNA quality is not so good, you could amplify the RNA, and get
certain amount of cDNA. In Agilent bioanalyzer, it is hard to say whether
the cDNA quality is good or not. If you compare some samples (for example
Mut vs Ctr, disease vs healthy), more or less you could get NGS result, but
how good of the data quality, it really hard to say. |
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C*******e
发帖数: 4348 | 46 我的意思是说你用VTTTT-adaptor去合成cDNA的时候
真正跟mRNA配对的只有VTTTT而已
如果先做一步mRNA-DNA adaptor的连接工作
后面用adaptor specific primer合成cDNA的时候配对的可以是你设计多长就多长
当然具体到实验这个会不会有帮助
谁也没办法预测 |
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h***a
发帖数: 145 | 47 最近设计实验，但不知道这个实验是不是doable.请大家帮帮眼
我想做single cell的 transcriptome（可能只会取一部分感兴趣的gene做）.
具体就是取细胞，染抗体，上流式分离细胞。然后分出来的细胞提rna,转录cDNA, 在做
microarray /next generation sequencing?(这个我只听过名字）/real time PCR?。
。考虑是rna 和cDNA 的效率和量不知道能不能往下做。
做过的同志指导一下吧。 |
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p*****u
发帖数: 191 | 48 乙肝，国病，在过去里程碑式的研究发现中没有一个源于国内科学家的发现，无论
是病原发现、基因克隆、还是疫苗开发、或者治疗性的药物。北生所的李文辉课题组发
现乙肝新受体：NCTP基因，这个是一个有意义的研究，但是这个研究是里程碑式的发现
吗？是独一无二的开创，还是众多研究发现中的其中一员，新浪微博上有一位传染病专
家这样评论“一篇文章而已”。
从临床和疾病控制角度来说，控制乙肝的关键依然是提高疫苗接种的覆盖程度，这
是对群体最有效的方法，更多的精力和物力应该集中到提高疫苗保护率，降低疫苗失败
的研究原因中去。对于现症的慢乙肝患者，更重要的是提高医保的覆盖面积，让更多病
人有条件接受规范的、长疗程的抗病毒治疗。对于肝硬化和肝癌的患者，更重要的采用
综合的治疗措施，主要是外科方法来延长生命。正如10年前出现的SARS，传染病隔离措
施的重要性远远超越病原学研究。这些是大范围的政府和政策行为，卫生部的最大的工
作目标就是让每人每年享有300元的卫生服务。
饶毅教授近期对乙肝的研究进展进行了非常好的描述，饶教授列举了乙肝里程碑的
发现、列举了国内科学家在乙肝动物模型研究中的重... 阅读全帖 |
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w*****t
发帖数: 179 | 49 问个腺病毒的问题，用的是PAD EASY 系统。将CDNA 克隆进PSHUTTLE后，Q-PCR 和WB都
可以检测到，但是包装病毒后，可以测到滴度。但是再感染细胞却检测不到表达，再取
少量病毒煮沸后PCR全长CDNA，也检测不到。但是的确有病毒，不知道问题再那里？特
地请教有经验的大侠，非常感谢。 |
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d****d
发帖数: 214 | 50 I have not used lentiviral vector before, so I cannot comment on that. But
as I said, I can get over 90% transduction efficiency using the pMSCV vector
to express just one cDNA. When I use 2A strategy to express two or three
cDNAs, then I can get 50% transduction efficiency, which should be
acceptable for many applications. |
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